Методы выявления мутаций. ПЦР анализ и его роль в выявлении мутаций.
Обзор литературы провел Резидент КазНМУ Гасанов А.
Наиболее эффективный способ выявления мутаций - секвенирование к ДНК или отдельных экзонов. Довольно часто первичный поиск нарушений в колирующих областях гена осуществляют именно таким образом. Для генов, имеющих сравнительно небольшие размеры (например, ген фактора IX свертывания крови, детерминирующий гемофилию В), метод прямого секвенирования иногда используют как основной метод сканирования мутаций. Однако, несмотря на наличие методик (различные модификации ПЦР, использование мРНКлля получения к ДНК), переводящих секвенирование в разряд рутинных методов, секвенирование полноразмерной к ДНК (т.е. всех экзонов) для выявления мутаций у отдельных индивидов остается трудоемкой, дорогой и требующей больших затрат времени процедурой.
Поэтому на практике полученные путем амплификации или клонирования фрагменты ДНК предварительно тестируют на наличие мутаций более простыми методами, основанными на сравнении физико-химических характеристик мутантных и нормальных последовательностей. Однако точные молекулярные характеристики каждой мутации независимо от ее природы (замены нуклеотидов, делеции, дупликации, инсерции и др.), могут быть получены только путем прямого секвенирования.
С помощью ПЦР и последующего электрофореза продуктов амплификации в полиакриламидном или агарозном геле обанаруживают мутации, изменяющие длину амплифицированных фрагментов. К таким мутациям относятся делеции и инсерции.
