Предгибридизация срезов. Депарафинирование срезов и демаскирование нуклеиновых кислот
Обзор литературы провел резидент КазНМУ Гасанов А.
Многие экспериментаторы после демаскирования нуклеиновых кислот перед гибридизацией инкубируют срезы в не содержащей зонда гибридизационной смеси, по аналогии с тем, как это делается при гибридизации на фильтрах. Наш опыт и опыт других авторов говорит, что этот этап не является обязательным при выявлении вирусной ДНК, геномной ДНК и мРНК с помощью неизотопных методов. Однако при работе с радиоактивно мечеными зондами предгибридизация бывает необходима.
Некоторые варианты гибридизации in situ включают дополнительные процедуры, например ацетилирование и обработку кислотой. Однако они не оказывают существенного влияния на результаты, и подробное описание отдельных модификаций метода ГИС дано в тех главах, где рассматривается использование ГИС для решения конкретных задач.
Депарафинирование срезов и демаскирование нуклеиновых кислот
Материалы
Протеиназа К (Boehringer Mannheim) или пепсин-HCl (Sigma, UK)
ФСБ
Чашки Терасаки (Gibco, UK)
Методика
А. Депарафинирование
1. Из парафиновых блоков делают срезы толщиной 5мкм и помещают их на подготовленные по описанному в протоколе методу предметные стекла.
