Утверждены
совместным приказом
и.о. Министра здравоохранения
Республики Казахстан
от 1 октября 2004 года № 725
и Министра сельского хозяйства
Республики Казахстан
от 7 октября 2004 года № 575
"Об усилении мероприятий по
профилактике сибирской язвы
в Республике Казахстан"
Методические рекомендации
"Способы и рецептура приготовления дифференциальных питательных сред и
другие методы, используемые при выделении возбудителя сибирской язвы"
1. Приготовление среды Леффлера
1. Для приготовления среды Леффлера в стерильные бактериологические пробирки разливают по 4,0-5,5 мл нормальной лошадиной сыворотки. Пробирки загружают в аппарат Коха и скашивают при 80°С в течение 1 часа. Затем быстро (для образования конденсата) помещают в холодильник. Среда длительное время хранится в холодильнике.
2. Для выявления капсулообразования в среду Леффлера делают посев суточной исследуемой культуры (сначала в конденсат, а затем по штриху). Посевы помещают в эксикатор. Далее исследование идет по стандартной методике.
2. Разведение пенициллина для постановки "жемчужное ожерелье"
3. Во флакон с пенициллином (1 миллион единиц) вносим 10 мл физиологического раствора (встряхиваем до полного растворения). Получаем разведение 1:100000.
4. Из флакона берем 0,5 мл и вносим в пробирку с 4,5 мл физиологического раствора (встряхиваем до полного растворения). Получаем разведение 1:10000.
5. Из пробирки берем 0,5 мл и вносим в следующую пробирку, содержащую 4,5 мл физиологического раствора (встряхиваем до полного растворения). Получаем разведение 1:1000.
6. Из пробирки берем 0,5 мл и вносим в следующую пробирку, содержащую 4,5 мл физиологического раствора (встряхиваем до полного растворения). Получаем разведение 1:100.
7. Во флакон, содержащий 80 мл бульона Хоттингера и 20 мл нормальной лошадиной сыворотки, вносим 0,5 мл пенициллина из последней пробирки.
8. В бульон, содержащий 80 мл бульона Хоттингера и 20 мл нормальной лошадиной сыворотки (предварительно прогреть при 560 С- 30 минут), вносим 0,5 мл раствора, содержащий разведение пенициллина 1:100. Затем приготовленный вышеописанным способом бульон разливаем по 3 мл и засеваем по полной петле суточной исследуемой культуры или несколько капель бульонной. Инкубируем в течение 3-6 часов при 37°С, после чего делаем мазок на стекле, высушиваем и наливаем на всю поверхность мазка жидкость Карнуа, содержащую 6 частей этилового спирта, 3 части хлороформа и 1 часть ледяной уксусной кислоты, до ее испарения. После чего мазок промывают водой и в течение 1 минуты окрашивают метиленовой синькой. Сибиреязвенный микроб располагается в виде цепочек, напоминающие бусы из жемчуга. Сапрофитные бациллы - в виде цепочек (не раздутые).
3. Способы окраски для обнаружения капсулы возбудителя сибирской
язвы
