Смешанная реакция агглютинации сперматозоидов. Тест сперматозоидов с латексными частицами
Обзор литературы провел резидент КазНМУ Гасанов А.
MAR-тест с антителами класса IgA и IgG проводят путем смешивания образца нативного эякулята с частичками латекса или эритроцитами, покрытыми человеческими антителами класса IgA или IgG. К этой смеси добавляют моноспецифическую IgG-антисыворотку. Образование смешанных агглютинатов между частичками и подвижными сперматозоидами показывает, что последние покрыты антителами класса IgA или IgG. Однако диагноз иммунологического бесплодия должен быть подтвержден тестами на взаимодействие сперматозоидов с цервикальной слизью.
В модификации теста (Bronson, 1984) вместо эритроцитов используются частицы латекса.
Тест с латексными частицами. Частицы латекса представляют собой полиакриламидные сферы, ковалентно связанные с кроличьими иммуноглобулинами против глобулинов человека. При помощи этого теста одновременно можно определять наличие антител класса IgA и IgG.
Процедура анализа. Модификация на нашивном эякуляте. На предметное стекло наносят 10 мкл неотмытого эякулята, 10 мкл латексных частичек, покрытых IgG или IgA (коммерческого производства), и 10 мкл антисыворотки к IgG или IgA человека.
Сначала перемешивают капли эякулята и латексных частичек, покрытых IgG (или IgA), затем добавляют к ним каплю антисыворотки. Накрывают смесь покровным стеклом большего размера. Через 2-3 мин и еще раз через 10 мин исследуют препарат в фазово-контрастном либо в световом микроскопах при увеличении х400 или х6ОО.
Если сперматозоиды не покрыты антителами, то при исследовании видно, что они свободно двигаются между частичками, которые склеиваются между собой и образуют группы (это подтверждает, что препарат приготовлен правильно).
Если же сперматозоиды покрыты антителами, то к подвижным сперматозоидам прикрепляются частички латекса. Постепенно агглютинаты становятся настолько массивными, что подвижность сперматозоидов резко ограничивается.
Следует подсчитать, по крайней мере, 200 сперматозоидов и выявить процент подвижных, к которым прикреплены латексные частички.
Модификация на отмытом эякуляте. Сперматозоиды отделяют от семенной жидкости двукратным центрифугированием, осадок смешивают с буфером для получения суспензии. Суспензию сперматозоидов смешивают с суспензией латексных частиц. Полученный препарат исследуют под фазово-контрастным микроскопом при увеличении х400. Латексные частицы склеиваются с подвижными сперматозоидами, на поверхности которых имеются антитела.
