Утвержден
приказом Председателя
Комитета контроля медицинской и
фармацевтической деятельности МЗ РК
от 28 июля 2010 года № 412
Инструкция
по применению изделия медицинского назначения для потребителя
(аннотация-вкладыш)
Название изделия медицинского назначения
Набор реагентов «РеалБест ДНК Mycoplasma genitalium» для выявления ДНК Mycoplasma genitalium методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Состав и описание изделия
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комлементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных последовательностей с этих праймеров Taq-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР.
Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специфичного для данного участка ДНК возбудителя инфекции гибридизационного ДНК-зонда, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5′ конце флуоресцентный краситель, а на 3′ конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5′-3′ нуклеазной активности Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5′ конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК M. genitalium из клинических проб совместно с предварительно внесённым внутренним контрольным образцом (ВКО).
2. СОСТАВ НАБОРА
Положительный контрольный образец универсальный (ПКО) − на основе плазмидной ДНК со встройкой фрагментов ДНК возбудителей инфекций - 1 фл., 1 мл;
Готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 96-луночный планшет (состоящий из 12 стрипов).
Стрипированные крышки - 12×8 шт. или оптическая плёнка - 3 листа.
Внимание! ПКО должен пройти процедуру выделения ДНК с помощью наборов «РеалБест ДНК-экспресс», «РеалБест ДНК-экстракция 1», «РеалБест ДНК-экстракция 2» или «РеалБест экстракция 100», согласно инструкциям к наборам
3. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
амплификатор с флуоресцентной детек-цией в режиме реального времени: «iQ iCycler», «iQ5 iCycler», «CFX96» (фирма Bio-Rad, США), «ДТ-96» (фирма «НПО ДНК-Технология», Россия) или их аналог;
ПЦР-бокс или отдельный стол, освещаемый УФ-лампой (например, «Циклотемп», фирмы СП «РТС», Россия);
холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2-8)°С (например , «Минск», «Атлант»);
