| | Приложение 7 Утверждено приказом Министерства здравоохранения Кыргызской Республики от 22 сентября 2015 года № 544 |
Инструкция
по определению группы крови перекрестным способом при помощи стандартных эритроцитов и цоликлонов
Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи стандартных эритроцитов и цоликлонов.
а. Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых антигенов в эритроцитах испытуемой крови при помощи стандартных сывороток и групповых антител в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов.
б. Для определения группы крови перекрестным способом кроме цоликлонов используют стандартные эритроциты группы О, А1 и В.
в. Кровь для исследования берут из вены или места укола пальца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для отделения сыворотки (для лучшего отделения сыворотки через 3-5 минут следует отделить сверток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой).
г. Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: О, А1 и В.
На верхнем крае надписывают фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.
д. Под соответствующими обозначениями групп крови на пластинку наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов.
е. На нижнюю часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной (0,1 мл) капле цоликлонов в следующем порядке слева направо: анти-А, анти-В, анти-АВ.
ж. Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекают сыворотку (осторожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой (0,1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0,01 мл) капле рядом с каждой каплей цоликлонов.
з. Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами (сухой стеклянной палочкой), пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят не менее пяти минут. Агглютинация в каплях со стандартной сывороткой обычно начинается быстро (10-30 секунд). Агглютинация в каплях, в которых сыворотку крови испытывают со стандартными эритроцитами, может наступить поздно (к концу пятой минуты), в связи с возможностью низкого титра содержащихся в исследуемой сыворотке антител.
и. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения пяти минут.
Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом
Учет реакции производится путем сопоставления результатов, полученных при помощи цоликлонов и стандартных эритроцитов (см. табл.2).
