Гибридизация in situ для диагностики цитопатологий
Обзор литературы провел резидент КазНМУ Гасанов А.
Для обнаружения в цитологическом материале нуклеиновых кислот разработано множество разнообразных методов. Большинство из них предполагает выделение нуклеиновых кислот, следовательно, разрушение клеток, и в последнее время все большее применение находят не деструктивные методы, прежде всего гибридизация in situ. В первую очередь это касается генетического материала вирусов. Преимущество гибридизации in situ состоит в том, что специфические нуклеотидные последовательности можно локализовать микроскопическими методами непосредственно в клетке. Большинство имеющихся на сегодня данных получено на ДНК, поэтому мы остановимся на применении метода ГИС только к нуклеиновым кислотам этого типа. Здесь речь пойдет о более подходящих для рутинной диагностики цитопатологий неизотопных методах.
Цитологический материал можно получить и подготовить разными способами, при этом лучше по возможности не вносить в отработанную процедуру никаких изменений.
Цитологические препараты бывают двух основных типов:
нативные мазки;
мазки, полученные методом капли или осаждением клеток на стекло центрифугированием клеточной суспензии.
Первый, наиболее распространенный способ не предусматривает никакой предварительной очистки препаратов. Это создает проблемы при анализе, например, аспиратов или вышелушивающихся клеток шейки матки, когда эпителиальные клетки перемешаны с клетками из очага воспаления, слизистым секретом и бактериями. Как правило, цитологического материала для анализа бывает очень мало, поэтому препараты лучше всего готовить из клеточных суспензий с последующей их очисткой и нанесением на стекла центрифугированием или методом капли. Следует помнить, что в цитологическом препарате клетки не связаны друг с другом, и, работая с мазками шейки матки, нежелательно использовать центрифугирование, при котором клетки могут слипаться и смазывать всю картину; если есть хоть какая-то возможность получить мазки, окрашенные пероксидазой-антипероксидазой, лучше воспользоваться этим методом.
