Спермограмма. Микроскопическое исследование эякулята
Енцов Д.В.
Микроскопия выполняется после полного разжижения, не позже чем через 60 минут. Оценивается концентрация сперматозоидов, их подвижность и строение; также проводится подсчет и изучение иных клеточных элементов эякулята*. Количество, концентрация и подвижность сперматозоидов изучается на прижизненных нативных препаратах без окраски. Концентрация сперматозоидов и их подвижность определяется при помощи счетной камеры Горяева. Оценка жизнеспособности сперматозоидов - используются нативные препараты с прижизненной окраской. Морфология сперматозоидов изучается после фиксации препарата и специального окрашивания (окраска препарата выполняется гематоксилин-эозином; также используется метод окраски по Папаниколау, Шору и Май-Грюнвальду-Гимзе; исследование наиболее информативно при окраске по Папаниколау); исследование выполняется с помощью светового или фазово-контрастного микроскопа с рабочим увеличением (объектив 40х, окуляр10х).
Определяемые параметры во время проведения микроскопического исследования эякулята:
-определение количества сперматозоидов
-оценка подвижности сперматозоидов
-оценка жизнеспособности сперматозоидов
-оценка морфологии сперматозоидов
-исследование «круглых» клеток
-определение агглютинации сперматозоидов
-оценка неклеточных структур
Количество сперматозоидов (нормы концентрации сперматозоидов рекомендованы ВОЗ в 1992 г)
нижняя граница числа сперматозоидов 1 мл эякулята должна составлять 20 миллионов
Олигозооспермия
снижение числа сперматозоидов менее 20 миллионов в 1 мл спермы - первая степень
в 1 мл эякулята содержится от 10 до 20 миллионов сперматозоидов - вторая степень
в 1 мл эякулята содержится менее 10 миллионов сперматозоидов - третья степень
Азооспермия - в эякуляте отсутствуют сперматозоиды
Криптоспермия - наличие единичных сперматозоидов, определенных после центрифугирования эякулята
Гиперспермия - в 1 мл эякулята число сперматозоидов превышает цифру 150 миллионов (по некоторым данным эта цифра равна 120 миллионам)
Подвижность сперматозоидов
Варианты подвижности сперматозоидов
(согласно критериям ВОЗ):
a-сперматозоиды
с быстрым поступательным движением
(скорость движения таких сперматозоидов составляет более чем пять длин головок или половины хвоста за 1 секунду, при температуре 37 градусов)
в норме считают не менее 25%
b-сперматозоиды
с медленным поступательным движением
(скорость движения таких сперматозоидов составляет менее чем пять длин головок или половины хвоста за 1 секунду, при температуре 37 градусов)
количество прогрессивно подвижных сперматозоидов (a+b)
должно составлять не менее 50%
c-сперматозоиды
с непоступательным движением
(или же крайне медленным поступательным движением по прямой; сюда же относят сперматозоиды, имеющие движение по кругу, даже если эта скорость велика)
не более 2%
d-сперматозоиды
неподвижные сперматозоиды
должно быть менее 50%
фертильность спермы
тем выше, чем больше число сперматозоидов с активной прогрессирующей подвижностью
значения физиологической нормы могут быть весьма вариабельны, и наступление беременности происходит и при значительно худших показателях подвижности сперматозоидов, чем нормы ВОЗ
причины, которые в той или иной степени действуют на показатели подвижности
экзогенные факторы
неблагоприятные факторы внешней среды, различные токсические влияния, колебания климатических показателей, злоупотребление алкоголем, курение,действие электромагнитного излучения, неблагоприятные условия работы
эндогенные факторовы
различные аномалии строения и функционирования жгутикового аппарата сперматозоидов; среди них известны генетические нарушения, которые изменяют нормальное строение аксонемы и ферментопатии, что приводит к нарушениям энергетических процессов, происходящих во время движений жгутиков; часто это клеточные нарушения, например, патология митохондрий
Жизнеспособность сперматозоидов
Оценка жизнеспособности сперматозоидов:
После разжижения сперма перемешивается пипеткой, далее на предметное стекло помещается капля неразведенного эякулята и подвергается окраске (лучшим методом окраски считается окраска по Блуму); после высушивания приступают к микроскопии; препарат накрывается обычным покровным стеклом и через 2 минуты микроскопируется подчитывается общее число сперматозоидов в поле зрения (желательно не менее 500) и ведется подсчет мертвых сперматозоидов (поскольку живые сперматозоиды не окрашиваются, а мертвые окрашиваются в розовый цвет, то достаточно просто их отличить друг от друга).
процентное содержание мертвых сперматозоидов определяется по формуле:
C мертвые (%) = (C розовые / C общие) х 100
в норме число живых сперматозоидов должно быть более 75%,
иногда используется индекс нормальных подвижных сперматозоидов (ИНПС), который определяется по формуле:
ИНПС = V х C х A х B / 10х6, где
V - это объем эякулята,
C - концентрация сперматозоидов,
A - процент сперматозоидов с прогрессивной подвижностью (a +b) и
B - процент морфологически нормальных сперматозоидов.
если значения индекс нормальных подвижных сперматозоидов больше или равен 6х10х4, то это говорит о нормальной фертильности
Морфология сперматозоидов
Нормальными (морфологически) сперматозоидами считают такие сперматозоиды, которые имеют овальную головку (может быть заострена), хорошо различимую акросому и жгутик.
Число морфологически нормальных сперматозоидов не должно быть менее 30% (по критериям ВОЗ)
Тератозооспермия - повышение числа патологических форм сперматозоидов
ПРАВИЛО KRUGER
(общепринятое определение нормального сперматозоида)
Нормальный сперматозоид - это такой, который обнаруживается в верхнем отделе цервикального канала женщины через 8 часов после полового акта».
Варианты патологических форм сперматозоидов
с атипичным строением головки
макроцефалия (большая головка) и микроцефалия (маленькая головка); могут быть варианты аномалий формы головки (каплевидная, круглая, веретенообразная, грушевидная, аморфная, резко-заостренная); сперматозоиды с неправильным строением акросомы (слишком маленькая акросома, занимающая менее 40% площади головки; несимметричная акросома; вакуолизированная акросома); головка сперматозоида может быть резко вакуолизирована, что также считается аномалией; нередки сперматозоиды с двумя (и более) головками, а также сперматозоиды, имеющие множество ядер
с атипичной шейкой
различают сперматозоиды с утолщенной шейкой; также аномальными считаются сперматозоиды, у которых угол между головкой и жгутиком менее 180 градусов
имеющие цитоплазматические капли в области шейки или головки (более половины головки)
с атипичным строением жгутика - среди них выделяют короткий жгутик; также могут быть сперматозоиды с изломанной формой жгутика, неравномерной толщины, закрученными жгутиками
сперматозоиды, имеющие более одного дефекта (сочетают в себе несколько аномалий одновременно)
Агглютинация сперматозоидов (склеивание сперматозоидов между собой)
истинная агглютинация - происходит прилипание сперматозоидов друг к другу
слипание может быть разным - некоторые сперматозоиды соединяются головками, некоторые хвостами, а некоторые в виде головка-хвост; если имеется большое значение показателя агглютинации, то это может говорить о наличии иммунологических причин бесплодия; также это встречается при аутоиммунных процессах и хронических воспалениях. Иногда умеренное слипание наблюдается в сперме здоровых, фертильных мужчин.
ложная (неспецифическая) агглютинация - слипание сперматозоидов с эпителиальными клетками, макрофагами, с фрагментами разрушенных клеток или комками слизи
Результат определения агглютинации сперматозоидов выдается в количестве плюсов «+»
«+» - небольшие единичные группы слипшихся сперматозоидов (не более 5 в группе)
«++» - группы агглютинирующихся сперматозоидов составляют значение 10 - 20 клеток; группы единичны
«+++» - определяются более 5 групп, склеенных сперматозоидов, причем в группе их число достаточно большое (несколько десятков)
«++++» - в этом случае имеются множество полей зрения, занятых слипшимися сперматозоидами
«Круглые» клетки»
Под «круглыми» клетками понимают все клеточные структуры эякулята, кроме сперматозоидов; кним относятся: лейкоциты, макрофаги, незрелые половые клетки, эпителиальные клетки, дегенеративные клеточные формы, эритроциты (выявляются только при патологиях); это исследование выполняется путем микроскопии окрашенных препаратов или же нативных препаратов в счетной камере; для окраски рекомендуется использовать метод Май-Грюнвальда-Гимзе.
Неклеточные структуры
К ним относятся лецитиновые зерна, кристаллы Беттхера, амилоидные тельца, слизь.
лецитиновые зерна - представляют собой мелкие образования округлой формы; имеют белесоватый цвет; в норме их достаточно много; уменьшение числа лецитиновых зерен свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса в предстательной железе.
кристаллы Беттхера - бесцветные структуры, имеющие удлиненную форму; при окраске раствором Люголя окрашиваются в синий цвет; по своей сути это продукт кристаллизации секрета предстательной железы; большое их количество также говорить о наличии хронического простатита.
амилоидные тельца - являются аналогами конкрементов округлой формы; центр образований может быть мелкозернистым, желтого цвета; эти образования образуются в случаях длительного отсутствия семяизвержений; иногда могут быть и при простатите.
слизь в норме эякуляте отсутствует, при наличии большого числа слизи стоит заподозрить хронический воспалительный процесс в семенных пузырьках и в предстательной железе; возможно, что наличие слизи может приводить к нарушениям подвижности сперматозоидов из-за того, что вязкая слизь окружает сперматозоиды и затрудняет их движение.
*эякулят - биологический материал, который выбрасывается в момент семяизвержения из мочеиспускательного канала; он состоит из клеточный массы, включающей в себя сперматозоиды, лейкоциты (и другие форменные элементы), эпителиальные клетки и жидкую часть (смесь секрета простаты, бульбоуретральных желез, а также желез уретры и парауретральных желез).