Непрямой тест сперматозоидов с иммунными шариками
Исследование взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью
Обзор литературы провел резидент КазНМУ Гасанов А.
Непрямой тест с иммунными шариками предназначен для обнаружения антиспермальных антител в инактивированной нагреванием сыворотке, семенной плазме и цервикальной слизи, разведенной бромелайном.
Дважды отмыть образец сперматозоидов донора буфером I, как описано выше.
Довести отмытую суспензию сперматозоидов до концентрации 50 х 106/мл буфером II.
Развести 10 мкл тестируемой жидкости в 40 мкл буфера II, добавить 50 мкл отмытой суспензии сперматозоидов и все тщательно смешать. Инкубировать смесь в течение 1 ч при 37°С.
Дважды отмыть сперматозоиды и провести тест с иммунными шариками, как описано выше.
Для каждой партии тестов следует проводить положительный и отрицательный контроль. Положительный контроль проводят с использованием сыворотки донора с высокими титрами антиспермальных антител (в сыворотке) по результатам непрямого теста с иммунными шариками.
Эту сыворотку подвергают анализу параллельно с каждой партией исследуемых образцов.
Количественные методики:
Иммуноферментный анализ (Zanchetta, 1982; Alexander & Bearwood, 1983).
Радиоиммунный анализ (Haas, 1980).
Проточная цитометрия (Haas & Cunningam, 1984).
Критерий. Положительным считается результат обнаружения АСАТ в крови более 75 МЕ/мл.
Определение специфических антиген-антительных связей:
Иммуноблоттинг (Hayes, 1989; Snow & Ball, 1992).
Хроматография с иммуноабсорбцией (Roitt, 1997).