Смолы в иммуноцитохимии. Фиксация препаратов смолами
Обзор литературы провел резидент КазНМУ Гасанов А.
Препарат ткани, предназначенный для электронно-микроскопических исследований, нужно заключить в достаточно твердый материал, чтобы можно было получить ультратонкие срезы. Для иммуноцитохимии удобны как эпоксидные (аралдит, эпон), так и акриловые (ловикрил К4М, Уайт LR) смолы.
Эпоксидные смолы не смешиваются с водой, поэтому после фиксации образцы ткани должны быть дегидратированы. Эти смолы полимеризуются при нагревании. Если иммуномечению подлежат термолабильные пептиды, то полимеризацию можно проводить в течение нескольких суток при температуре 37оС, а не при 60оС в течение ночи; иногда полимеризацию осуществляют в УФ-свете при комнатной температуре или 4°С (заметим, что при фиксации осмием последний способ непригоден). Заливка в эпоксидные смолы проводится обычным способом, как при любом электронно-микроскопическом исследовании. Чтобы предотвратить экстракцию антигенов, нужно сократить до минимума время дегидратации и импрегнации ткани.
Смола Уайт LR немного смешивается с водой, поэтому ткани можно дегидратировать в 70% спирте, что уменьшает вероятность экстракции пептидных антигенов. Эта смола полимеризуется при нагревании и в нее удобно заключать ткани, фиксированные осмием. Проведя полимеризацию не до конца, получают более мягкие, чем обычно, блоки; они легче режутся, а срезы лучше окрашиваются. Подробнее эти вопросы рассматриваются в работе, Еще более предпочтительна смола ловикрил К4М, поскольку она может полимеризоваться при весьма низкой температуре (-30°С) и очень быстро полимеризуется при 4оС и при комнатной температуре. Однако полимеризация ловикрила в УФ-свете исключает фиксацию осмием. Процедура заливки описана в работе, а также в инструкциях, прилагаемых к препарату.