Утверждена
приказом Председателя
Комитета контроля медицинской и
фармацевтической деятельности МЗ РК
от 31 июля 2014 года № 514
Инструкция
по применению изделия медицинского назначения для потребителя
Название изделия медицинского назначения
Набор реагентов для дифференциального выявления и количественного определения ДНК вирусов папилломы человека 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов высокого канцерогенного риска методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «РеалБест ДНК ВПЧ ВКР генотип количественный» (комплект 1)
1. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
1.1. Принцип метода.
Принцип ПЦР-анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного участка ДНК возбудителя инфекции в ходе проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах: температурная денатурация ДНК-матрицы, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями ДНК-матрицы, синтез комплементарной цепи с этих праймеров Taq-полимеразой.
В основе регистрации процесса амплификации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию гибридизационного ДНК-зонда, специфичного для выбранного участка ДНК возбудителя инфекции, который в ходе реакции связывается с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5΄-конце флуоресцентный краситель, а на 3΄-конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5΄-3΄-нуклеазной активности Taq-полимеразы, зонд расщепляется с 5΄-конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции. При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Учёт эффективности выделения ДНК из образцов обеспечивается выделением ДНК возбудителя инфекции из клинических проб совместно с предварительно внесённым внутренним контрольным образцом (ВКО).
В анализируемых образцах дополнительно оценивается содержание ДНК гена HMBS человека с целью валидации качества забора материала и повышения достоверности результатов количественного определения вирусов папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР).
Для анализа каждого образца на содержание ДНК ВПЧ ВКР используется половина стрипа - 4 пробирки с ГРС 1, 2, 3, 4 в каждой из которых осуществляется амплификация ДНК трёх из 12 типов ВПЧ (см таблицу 1), а также одна пробирка с ГРС 5 для оценки содержания ДНК гена HMBS человека в образце.
Таблица 1
| Пробирка | Типы ВПЧ |
| ГРС1 | 16, 18, 39 |
| ГРС2 | 33, 45, 56 |
| ГРС3 | 31, 35, 58 |
| ГРС4 | 52, 51, 59 |
2. СОСТАВ НАБОРА