Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями
Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.
Принцип метода
Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.
Реактивы
Можно использовать один из следующих красителей:
1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
2. Раствор азура I: азур I - 1 г, аммония оксалат - 0,4 г, натрия хлорид - 0,8 г, этиловый спирт 96% - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 - 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
3. Раствор азура II: азур II - 1 г, натрия цитрат - 5 г, натрия хлорид - 0,4 г, дистиллированная вода - 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37°C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 - 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.
Специальное оборудование
Микроскоп.
Ход определения
Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.
Окраска ретикулоцитов на стекле
При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 - 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.
Окраска ретикулоцитов в пробирке
Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.
Метод 1 - окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.