Утверждена
приказом Председателя
Комитета контроля качества
и безопасности товаров и услуг МЗ РК
от 13 января 2020 года № 025940
Инструкция
по медицинскому применению изделия медицинского назначения
1. Наименование медицинского изделия для диагностики in vitro:
Набор реагентов для выявления ДНК Helicobacter pylori методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РеалБест ДНК Helicobacterpylori) (комплект 1)
2. Состав и описание медицинского изделия:
2.1. Состав:
· положительный контрольный образец (ПКО) − на основе плазмидной ДНК со встройкой фрагментов ДНК Helicobacter pylori - 1 пробирка, 1 мл;
· внутренний контрольный образец (ВКО), лиофилизированный - 2 фл.;
· готовая реакционная смесь для ПЦР (ГРС), лиофилизированная - 48 пробирок.
Набор дополнительно комплектуется:
Ÿ оптической плёнкой - 1 лист;
Ÿ завинчивающимися пластиковыми крышками для флаконов с ВКО - 2 шт.
2.2. Принцип метода:
Принцип анализа основан на регистрации процесса амплификации выбранного фрагмента ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах: температурная денатурация, отжиг праймеров с комплементарными последовательностями, достройка полинуклеотидных последовательностей с этих праймеров Taq ДНК-полимеразой.
В основе используемого метода регистрации лежит измерение сигналов флуоресценции в каждом цикле ПЦР. Увеличение сигналов флуоресценции происходит благодаря использованию специфичных для данных участков ДНК Helicobacter pylori гибридизационных ДНК-зондов, которые в ходе реакции связываются с одной из цепей ДНК, обеспечивая также дополнительную специфичность метода. ДНК-зонд содержит на 5’-конце флуоресцентный краситель, а на 3’-конце - гаситель флуоресценции, значительно снижающий интенсивность флуоресценции. В ходе полимеразного синтеза комплементарной цепи, благодаря 5’-3’-нуклеазной активности Taq ДНК-полимеразы, зонд расщепляется с 5’-конца и происходит разобщение красителя и гасителя, приводящее по мере накопления продукта реакции к возрастанию сигнала флуоресценции.
При этом измеряемая интенсивность флуоресценции зависит от количества образовавшихся специфических ампликонов и динамика нарастания флуоресценции определяется исходным количеством ДНК возбудителя инфекции в образце.
Достоверность анализа контролируется по наличию положительного результата в образце ПКО, который подвергается процедуре выделения ДНК вместе с анализируемыми биопробами.
Учёт эффективности выделения ДНК Helicobacter pylori из образцов обеспечивается выделением ДНК из клинических проб совместно с предварительно внесённым внутренним контрольным образцом (ВКО).
2.3. Аналитические и диагностические характеристики
2.3.1.Чувствительность определение 100 копий ДНК Helicobacter pylori в пяти образцах, приготовленных из Стандартного образца предприятия (СОП) ДНК Helicobacter pylori - 100 %.