СТ РК ISO 20634-2016
Смеси для детского питания и взрослых
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА В12
С ПОМОЩЬЮ ОБРАЩЕННО-ФАЗОВОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(RP-HPLC)
(ISO 20634:2015 Infant formula and adult nutritionals - Determination of vitamin B12 by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), IDT)
1 Область применения
2 Термины и определения
3 Сущность метода
4 Реагенты и вещества
5 Оборудование
6 Проведение испытаний
7 Вычисления
Приложение А (информационное) Примеры хроматограмм
Приложение B (информационное) Точность данных
Приложение C (информационное) Пример методики квалификационных испытаний SPE картриджа
Библиография
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод количественного определения содержания витамина B12 в смесях для детского питания и взрослых (порошки, готовые к употреблению жидкости и жидкие концентраты) с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:
2.1 Витамин B12 (vitamin B12): Цианокобаламин и кобальтсодержащие корриноиды с биологической активностью витамина B12, такие как аквокобаламин, гидроксикобаламин, метилкобаламин и аденозилкобаламин, преобразуемые в цианокобаламин.
2.2 Смесь для взрослых (adult nutritional): Сбалансированные по питательным веществам, специально разработанные продукты питания, потребляемые в жидкой форме, которые могут представлять собой единственный источник питания, изготовленный из сочетания молока, сои, риса, молочной сыворотки, гидролизованного белка, крахмала и аминокислот, с добавлением и без добавления немодифицированного белка.
3 Сущность метода
Цианокобаламин и кобальтсодержащие корриноиды извлекаются из образца с использованием буфера ацетата натрия (pH 4,5), а последний преобразуется в цианокобаламин с использованием цианида калия при температуре 105 °С. Экстракты очищают и концентрируют с помощью С8 или С18 картриджей для твердофазной экстракции (SPE) и разделяют с помощью вытеснительной хроматографии SEC, т.е. хроматографией на молекулярных ситах, и обращенно-фазовой хроматографии. Содержание витамина B12 определяется с помощью жидкостной хроматографии с видимым улавливанием при 550 нм.
4 Реагенты и вещества
Во время исследования, если не указано иное, используют реагенты известной аналитической степени чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду, или воду эквивалентной степени чистоты.
4.1 Ледяная уксусная кислота.
4.2 Ацетонитрил, степень HPLC.
4.3 Драйерит, десиккант, безводный сульфат кальция, 8 меш.
4.4 Денатурированный этанол.
4.5 Муравьиная кислота, 88 %.
4.6 Цианид калия, 97 %.
4.7 Рибофлавин, со степенью чистоты от 98 % до 102 %.
4.8 Безводный ацетат натрия или тригидрат ацетата натрия, ОСЧ.
4.9 Такадиастаза, производства Accurate Chemical Co.1 или эквивалентный продукт.
4.10 Триэтиламин, степень HPLC.
